Bialaphos, Sodium Salt 雙丙氨膦鈉鹽

【除草劑，bar/pat轉基因篩選標記】

搜索關鍵詞：除草劑；轉基因植物篩選標記；農桿菌轉化；草銨膦（Glufosinate Ammonium）草丁膦（phosphinothricin，PPT）；雙丙氨膦（Bialaphos）；bar基因；pat基因；草銨膦-N-乙酰轉移酶；谷an酰胺合成酶（GS）；CAS：71048-99-2；

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除草機制：

雙丙氨膦（Bialaphos，也稱為Bilanafos）是由幾種土壤鏈霉菌代謝產生的一種天然有機磷三肽抗生素，結構上由兩個L-丙an酸殘基和一個谷an酸類似物草丁膦（phosphinothricin，PPT；也稱為glufosinate）組成。一旦進入正常細胞（不含抗性基因），其內的肽酶水解雙丙氨膦，釋放草丁膦化合物，從而抑制正常氮代謝和導致胞內氨累積，破壞谷an酰胺合成酶（glutamine synthetase，GS）相關的各種代謝活動，zui終殺死細胞。雙丙氨膦不僅是一種廣譜除草劑，還能強效抑制革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌、和一些真菌類植物病原菌生長。

植物基因工程研究（篩選標志）作用機理：

雙丙氨膦可用在許多植物物種（包括小麥，大麥，黑麥，燕麥，水稻和玉米）的轉化實驗，用來篩選含bar基因（from Streptomyces hygroscopicus）或pat基因（from Streptomyces viridochromeogenes）的轉基因工程細胞系，這兩種基因都能編碼草丁膦N-乙酰轉移酶（phosphinothricin N-acetyltransferase），使其轉化成為一種無GS抑制活性的化合物，從而使得細胞對雙丙氨膦和草丁膦產生抗性。轉基因玉米研究，雙丙氨膦比草銨膦的活性更強；轉基因小麥研究，雙丙氨膦是zui可靠的選擇標準；酵母基因工程中，雙丙氨膦逐漸成為重要的選擇標準。

基本特性：

1）CAS NO：71048-99-2

2）同義名：2S-amino-4-(hydroxymethylphosphinyl)butanoyl-L-alanyl-L-alanine, monosodium salt; SF-1293;

3）分子式：C₁₁H₂₁N₃O₆P·Na

4）分子量：345.26 g/mol

5） 外觀：白色或淺棕色結晶性粉末

6）純度：≥95%

7）溶解性：溶于水（10mg/ml）

8） 化學結構式：

應用案例【轉基因的小麥幼胚/愈傷組織篩選】（僅作參考）：

1. 使用草銨膦（PPT）或雙丙氨膦進行轉化細胞的篩選；

2. 粒子轟擊（bombardment）后將未成熟幼胚逐個轉移到E3培養基，維持培養7-14天；

3. 胚胎轉移到含5µg/ml PPT（或雙丙氨膦）的MSCB5培養基（*輪篩選用培養基），黑暗培養2周；于這2周內不能正常生長的愈傷組織直接扔棄。

4. 用解剖刀將在MSCB5培養基上增殖的細胞簇解離，亞克隆，轉移到含有10 µg/ml PPT（或雙丙氨膦）的MSCB10培養基，維持培養4周。

5. 在含5µg/ml或10µg/ml PPT（或雙丙氨膦）的培養基上篩選過程的持續周期約為50-75天。將所有培養物放到植物生長培養箱內，設置25 °C，黑暗培養。每一個轉基因愈傷組織在含有篩選標志的培養基上zui終生長為大量的胚性愈傷組織。

6. 設置1-10µg/ml PPT（或雙丙氨膦）的梯度濃度來測試未轉化愈傷組織，以建立更加有效的篩選系統。每一次實驗大概準備20個目標培養平板。2個為對照，1個在N6C1上生長以監測培養物的健康情況，另1個在含5-10µg/ml雙丙氨膦的N6C1上生長以驗證未轉化細胞對選擇標志的反應。

【注意】：轉基因小麥愈傷組織的選擇實驗中雙丙氨膦是有效的篩選標志，然而雙丙氨膦不能殺死未轉化細胞。為了得到理想的篩選效果，建議低密度（大概每個平板上10個未成熟幼胚）亞培養粒子轟擊后的細胞。

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注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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 Sodium Salt 雙丙氨膦鈉鹽 抗生素

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