BL21 Star (DE3) Chemically Competent Cell 

        大腸桿菌化學感受態細胞

點擊丨商城購買 積分領好禮

產品標簽：

BL21 (DE3)；Rosetta (DE3)；Rosetta (DE3)；表達感受態細胞；pET表達載體；IPTG誘導；

產品訂購：更大包裝或產品技術問題，

【好消息】：見我司整理的BL21系列表達感受態細胞常見問題。

產品組分：

菌株描述

BL21 Star (DE3) 菌株來源于BL21(DE3)菌株，DE3命名表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體（其上攜帶lacUV5啟動子調控的T7 RNA聚合酶基因），IPTG用來誘導T7 RNA聚合酶的表達。該菌株攜帶一突變的rne基因（rne131），編碼合成截短的RNase E，此酶喪失mRNA降解能力從而提高mRNA轉錄體的穩定性和增加蛋白產量。另外，BL21 Star (DE3)是大腸桿菌B/r菌株，缺乏lon和外膜蛋白酶OmpT，降低外源重組蛋白的被降解，進一步增加了蛋白表達率。BL21 Star (DE3) 菌株特別設計適用于低拷貝，T7啟動子表達載體的非毒性蛋白的高水平表達。與BL21菌株相比， mRNA穩定性提高，BL21 Star菌株由于提高的mRNA穩定性，呈現出更高的異源基因基礎表達，因此不適合毒性蛋白表達。

BL21 Star (DE3) 菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm rne131(DE3)

產品描述

本品是大腸桿菌BL21 Star (DE3)菌株經特殊工藝制作所得的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19質粒檢測轉化效率可達108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1）   感受態細胞必須用干冰運輸。感受態細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態細胞的轉化效率。

2）   最好在冰上融化感受態細胞。

3）   進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4）   為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。

5）   產品包裝內含質粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。

6）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1）   取感受態細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管內，置于冰浴中。【注意：一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據實際情況分裝使用。需注意所用DNA體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。】

以下實驗以100 μl感受態細胞為例。

2）   向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻（或用手輕彈管輕輕混勻），冰浴靜置30min。

3）   42℃熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min。此過程不要搖動離心管。

4）   向每個離心管中加700 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5）   根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

相關產品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。

  大腸桿菌化學感受態細胞 表達分析      大腸桿菌化學感受態細胞 表達分析